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- 期別
- 2005-038-1-0057-0064
- 作者
- 蕭振文、蔡麗卿、陳裕信、曲鳳翔、楊鎮榮、陳立人
- 關鍵字
- 乳牛、性別鑑定、引子、聚合?連鎖反應。
- 摘要
- 本研究旨在利用聚合連鎖反應（polymerase chain reaction, PCR），測試 SRY/ZFX 引子進行乳牛性別鑑定的最適條件。探討之 PCR 條件包括粘合溫度、反應體積、循環數、MgCl2濃度、聚合濃度與 dNTP 濃度等，藉以推薦適合的 PCR 條件，改善細胞或胚性別鑑定的效率與敏感性。試驗利用體外培養（in vitro culture）之荷蘭母牛卵丘細胞或公牛之耳朵成纖維細胞做為性別鑑定之樣品，每組細胞數至少 10個，先經蛋白K（proteinase K）前處理，再測試各種影響 PCR 反應之重要條件。試驗結果顯示，利用 SRY/ZFX 引子進行細胞樣品之性別鑑定，PCR 之粘合（annealing）溫度在55~56℃間、40次循環、反應體積20 μl、2.5 mM之MgCl2、2~3u的Taq DNA聚合、200~300 μM之dNTP，可獲得最佳的 PCR 性別鑑定結果，此最適的 PCR 條件將可供體細胞或田間進行牛胚性別鑑定之參考。
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