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- 期別
- 2005-038-4-0281-0291
- 作者
- 蕭振文、蔡麗卿、劉瑞珍、戴謙、陳立人
- 關鍵字
- 乳羊、性別鑑定、即時聚合?連鎖反應、ZFX。
- 摘要
- 本研究旨在利用即時聚合?連鎖反應（real-time polymerase chain reaction, real-time PCR），配合SyberGreen（SYBR）與螢光標定探針（probe）進行乳羊的性別鑑定。試驗應用純化之乳羊基因組DNA與體外培養（in vitro culture）之阿爾拜因乳羊耳朵成纖維細胞做為性別鑑定之樣品。體細胞樣品先經蛋白K（proteinase K）處理後，利用ZFX/ZFY（ZFX/ZFY-linked zinc finger protein）引子進行PCR預先擴增（pre-amplification），獲得PCR產物後，設計nested PCR引子並應用SYBR進行real-time PCR。結果顯示，隨著起始的模板DNA增加，在較早的循環出現PCR擴增曲線，PCR產物具有高度專一性之解離曲線（dissociation curve），顯示 PCR 產物之高度特異性。預先擴增後之初次PCR產物配合nested PCR引子及性別特異TaqMan螢光探針進行雜合反應（hybridization），因樣品產生不同螢光而判定性別。試驗結果顯示，待測之乳羊基因組 DNA 或少至1個體細胞，進行雜合反應後均能準確鑑定性別。本研究顯示應用real-time PCR可直接鑑定乳羊樣品之性別而不需進行電泳分析，且具較高之敏感性與重覆性，具有田間乳羊性別鑑定之應用潛力。
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