體內發育、體外生產與體細胞核轉置牛胚之重要基因表現分析:
- 期別
- 2005-038-3-0183-0195
- 作者
- 蕭振文、蔡麗卿、曲鳳翔、劉瑞珍、劉振發、李善男、陳立人
- 關鍵字
- 牛胚、基因表現、細胞核轉置。
- 摘要
- 本研究主要目的在探討體內發育(in vivo)、體外受精與體細胞核轉置牛胚於不同發育階段(2細胞期至囊胚期)之重要基因表現。體外生產的牛胚(in vitro production, IVP)、體細胞核轉置(somatic cell nuclear trafer, SCNT)牛胚及田間牛胚非外科採集取得之部分活體牛胚,利用萃取套組純化mRNA後,利用反轉錄-聚合連鎖反應(reverse tracription polymerase chain reaction, RT-PCR)獲得互補DNA(complementary DNA, cDNA),再利用合成的引子進行PCR以分析重要基因的表現。結果顯示,分析的19種基因中,對照之常駐(housekeeping)基因β-actin與glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)、E-cadherin(E-cad)、octamer-binding tracription factor(Oct-4)、glutamine synthetase(GS)、heat shock protein 70.1(Hsp)、plakophilin(Plako)與poly(A)polymerase(Poly A)在不同來源、不同胚期的全部牛胚均有表現。因胚源與胚期不同而表現差異的基因有α-2 macroglobulin(A2M)、flavin-containing mono-oxygenase(FMO)、glucose traporter 1(Glut-1)與IGF-I receptor(IGF-Ir)。而在不同胚源、不同胚期均未測到表現的基因有connexin43(Cx43)、Cu/Zn superoxide dismutase(Cu/Zn SOD)、desmoglein 1(Dg1)、IGF-I、interferon tau(IF-τ)與Mn SOD。為了確認基因之表現是否正確,將測得表現的5種基因產物選殖入pGEN-T Esay Vector system II並進行DNA序列分析,結果與BLAST網路資料庫比對後顯示為正確之序列。本研究之方法與結果可做為牛胚發育生物學與探索基因表現之參考。