卵丘細胞之存否與不同抗凍液組成對豬卵母細胞玻璃化冷凍效果的影響
- 期別
- 2002-035-4-0357-0365
- 作者
- 劉振發、李俊德、李秀美、吳明哲、陳立人
- 關鍵字
- 豬、卵母細胞、玻璃化冷凍保存。
- 摘要
- 豬卵母細胞的冷凍保存有利於種源保存與供應其他胚顯微操縱研究之需。本研究之目的，係探討卵母細胞的去除與否和比例相異的冷凍保護劑對於不同成熟階段的豬卵母細胞以玻璃化法冷凍之影響。供試的卵丘─卵母細胞複合體（Cumulus-oocyte-complex, COC）係採集自屠宰場女豬卵巢的濾泡。玻璃化冷凍保存的保護劑為：以含18%胎牛血清的杜比克式改良式磷酸緩衝溶液（modified Dulbecco's phosphate buffered solution, mDPBS）調製成40%丙二醇（Ethylene Glycol）和18% Ficoll 70的溶液，再將此二溶液以不同的體積比例調製成為A（3:2）與B（1:1）二種抗凍液。供試的卵丘─卵母細胞複合體經不同時間（0、24與48小時）的體外成熟培養後，逢機分為去除與不去除卵丘細胞二群，分別各以二種抗凍液之一浸漬10分鐘後，裝填入0.25 ml麥管，直接投入液態氮中進行急速冷凍。解凍係在60℃溫水中行之。待內容物液化後以含蔗糖之mDPBS逐步將冷凍液置換出來。解凍卵母細胞的存活，則以螢光染劑SYBR-14和Prodidium iodide染色判定。結果顯示，具有完整卵丘細胞包被的卵母細胞以A抗凍液進行冷凍時，在體外培養0、24與48小時各個成熟階段，其冷凍解凍後之存活率分別為100.0%、96.0%與0；當以B抗凍液進行冷凍時，則其各個成熟階段卵母細胞的解凍後存活率分別為57.6%、69.0%與6.67%。而祼露的卵母細胞以A抗凍液進行冷凍時，在體外培養0、24與48小時各個成熟階段，其冷凍解凍後之存活率分別為與100%、34.5%與0；當以B抗凍液進行急速冷凍時，則其各個不同的成熟階段卵母細胞的解凍後存活率分別是29.0%、34.5%、和0。