台灣土雞卵白蛋白基因啟動子之選殖與 DNA序列分析
- 期別
- 2010-043-1-0041-0049
- 作者
- 劉振發、王佩華、蔡麗卿、王君今、林正鏞、戴謙、陳立人、蕭振文
- 關鍵字
- 台灣土雞、卵白蛋白基因、啟動子。
- 摘要
- 本研究在選殖台灣土雞（Taiwan native chicken）之卵白蛋白（ovalbumin）基因的啟動子，構築入載體中，供家禽基因轉殖之用途。試驗採集台灣土雞之血液樣品並應用套組純化基因組DNA。選殖卵白蛋白之引子係參考網路資料庫中雞卵白蛋白基因序列而設計，之後進行聚合瓷連鎖反應（polymerase chain reaction, PCR）及電泳，將特異之 PCR 產物回收純化供進行 DNA 序列分析。試驗結果顯示，進行 PCR後獲得 5.4 kb之特異片段產物，該片段包括了啟動子上游區之動情素-反應增強區（estrogen-respoive enhancer element, ERE)，其功能為調控卵白蛋白基因之表現效率。此外，為了提供將來測試比較不同啟動子調控區長度對表現效率的影響，也分別擴增出長度為 2.8 kb 及 675 bp 的部分卵白蛋白基因啟動子序列，供進一步次選殖之用。這些特異之 PCR 產物以膠體回收套組回收，選殖入 TOPO 載體進行 T-A cloning，經過 DNA 序列分析與 Basic LocalAlignment Search Tool（BLAST）比對，結果與 NCBI 基因庫中編號 V00382.1（Gallus gallus genefor ovalbumin）及 V00438.1（Chicken ovalbumin gene）序列具有最高之相似性，確定為雞之卵白蛋白基因啟動子序列。本試驗選殖的台灣土雞卵白蛋白基因啟動子序列，具有發展為基因轉殖研究用特異啟動子來源。