豬肌肉生長抑制素cDNA之選殖與表現載體之構築
- 期別
- 2007-040-3-0159-0168
- 作者
- 劉芳爵、陳全木
- 關鍵字
- 質體、前胜、表現載體。
- 摘要
- 本試驗目的在進行肌肉生長抑制素前胜? (myostatin propeptide) cDNA之選殖與其表現載體之構築，並將其轉形至酵母菌宿主細胞，藉以表現外源性之肌肉生長抑制素前胜?產物。試驗採用已選殖1128 bp肌肉生長抑制素互補去氧核糖核酸 (cDNA) 作為模板，利用巢式聚合?連鎖反應 (Nest PCR) 選殖，合成828 bp之肌肉生長抑制素前胜?PCR產物，並用限制?截切，將肌肉生長抑制素前胜?cDNA序列，再將之接入pGAPZ α A中，完成表現載體 (pGAPZ α A Myostatin-propeptide) 之建構。同時利用瓊脂電泳與限制?截切、核?酸序列分析與比對，確認肌肉生長抑制素前胜?之開放譯讀框架沒有被破壞。並將此構築完成之表現載體轉形至酵母細胞，再經SDS-PAGE與西方墨點法分析，確認有2株具有較高表現外源性重組肌肉生長抑制素前胜?之酵母菌轉形株。