利用第二型腺病毒伴隨病毒載體轉染建立攜有綠螢光蛋白質與新黴素耐受基因之小鼠胎體成纖維細胞株
- 期別
- 2006-039-4-0289-0299
- 作者
- 楊鎮榮、廖家信、薛佑玲、陳立人
- 關鍵字
- 第二型腺病毒伴隨病毒載體、綠色螢光蛋白質、新黴素耐受基因、STO小鼠胎體成纖維細胞。/
- 摘要
- 本研究之目的係利用第二型腺病毒伴隨病毒載體 (adeno-associated viral vector type 2, AAV2) 進行STO小鼠胎體成纖維細胞 (STO mouse embryonic fibroblast) 進行基因轉殖，期建立攜有外源綠螢光 (green fluorescent protein, GFP) 基因及新黴素耐受基因 (neomycin resistant gene, Neor)之STO小鼠胎體成纖維細胞株，以做為豬胚幹細胞之供養層細胞。試驗結果顯示，利用G418進行STO細胞之篩選試驗，其最適篩選濃度為400 μ g/ml，其篩選7天後的死亡率為41.8±11.6%。利用AAV2載體轉染STO小鼠胎體成纖維細胞後，轉染率可達50.9±17.1%，利用於培養液中添加400 μ g/ml的G418進行轉染後篩選，經過4次之繼代篩選後，純度達70.2±12.0%，再配合以流式細胞分析法 (flow cytometry) 進行GFP表現陽性(GFP )細胞分離，分離後之STO/GFP 小鼠胎體成纖維細胞之純度可達93.6±2.8%。且經過轉染後STO/GFP 細胞株，用於培養豬胚幹細胞，能維持幹細胞群落之未分化狀態，顯示本STO/GFP 細胞株可做為豬胚幹細胞之供養層細胞。並且，因為STO/GFP 細胞株攜有外源性GFP報導基因及Neor基因，未來可作為豬與其他物種的胚幹細胞進行基因轉殖試驗後，以neomycin篩選時之供養層細胞，為胚幹細胞之基因轉殖試驗提供有價值的應用基礎。