本試驗於熱季(2004年8～9月)進行，探討不同稀釋液、稀釋方法與平衡時間對水牛冷凍精液解凍後，於37℃培養0和3小時，對其精子活動力與經由精子低滲透壓膨脹試驗所測試之精子膜功能完整性之影響。試驗結果顯示，將稀釋液先以不含甘油之稀釋液稀釋，再於30℃添加含甘油之稀釋液時，對精液冷凍─解凍後，於37℃培養0小時後，其精子活動力與精子膜功能整性之結果，皆極顯著高於一段添加者(分別為57.2±3.4% vs. 51.3±5.5%及48.9±3.4% vs. 43.8±3.2%, P0.01)；培養3小時後，亦以兩段添加之精子膜功能完整性結果顯著高於一段添加者(28.0±2.3% vs. 25±3.4%, P0.05)。水牛精液於裝填降溫後，於5℃經2小時平衡時間處理。比0小時者，可顯著改善於37℃培養0小時(50.7±4.9% to 57.9±2.9%, P0.01)及3小時(24.7±2.6% to 26.4±1.6%, P0.05)之精子活動力；亦顯著改善解凍後經培養0小時(44.9±3.4% to 47.9±4.3%, P0.05)及3小時(25.5±2.9% to 28.2±2.7%, P0.05)之精子膜的功能完整性。比較三羥基甲基氨基甲烷及乳糖為基質的兩種不同稀釋液處理的效果時，精液經解凍後，於37℃培養0及3小時之精子活動力與精子膜功能完整性之評估皆無顯著差異，顯示兩稀釋液皆可應用於台灣水牛冷凍精液。由本試驗結果得知於製作台灣水牛冷凍精?時，可於30℃下，將精液先以不含甘油之稀釋液稀釋，再添加含甘油稀釋液後，進行裝填與封口，緩慢降溫至5℃後，經2小時的平衡時間，再進行冷凍過程，可得較佳之冷凍─解凍後，於37℃培養0和3小時之精子活動力與低滲透壓膨脹試驗所測試之精子膜功能的完整性，而其冷凍精液解凍後的人工授精授胎率為50% (9/18)。