體內發育、體外生產與體細胞核轉置牛胚之重要基因表現分析:
- 期別
- 2005-038-3-0183-0195
- 作者
- 蕭振文、蔡麗卿、曲鳳翔、劉瑞珍、劉振發、李善男、陳立人
- 關鍵字
- 牛胚、基因表現、細胞核轉置。
- 摘要
- 本研究主要目的在探討體內發育（in vivo）、體外受精與體細胞核轉置牛胚於不同發育階段（2細胞期至囊胚期）之重要基因表現。體外生產的牛胚（in vitro production, IVP）、體細胞核轉置（somatic cell nuclear trafer, SCNT）牛胚及田間牛胚非外科採集取得之部分活體牛胚，利用萃取套組純化mRNA後，利用反轉錄－聚合連鎖反應（reverse tracription polymerase chain reaction, RT-PCR）獲得互補DNA（complementary DNA, cDNA），再利用合成的引子進行PCR以分析重要基因的表現。結果顯示，分析的19種基因中，對照之常駐（housekeeping）基因β-actin與glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase（GAPDH）、E-cadherin（E-cad）、octamer-binding tracription factor（Oct-4）、glutamine synthetase（GS）、heat shock protein 70.1（Hsp）、plakophilin（Plako）與poly（A）polymerase（Poly A）在不同來源、不同胚期的全部牛胚均有表現。因胚源與胚期不同而表現差異的基因有α-2 macroglobulin（A2M）、flavin-containing mono-oxygenase（FMO）、glucose traporter 1（Glut-1）與IGF-I receptor（IGF-Ir）。而在不同胚源、不同胚期均未測到表現的基因有connexin43（Cx43）、Cu/Zn superoxide dismutase（Cu/Zn SOD）、desmoglein 1（Dg1）、IGF-I、interferon tau（IF-τ）與Mn SOD。為了確認基因之表現是否正確，將測得表現的5種基因產物選殖入pGEN-T Esay Vector system II並進行DNA序列分析，結果與BLAST網路資料庫比對後顯示為正確之序列。本研究之方法與結果可做為牛胚發育生物學與探索基因表現之參考。