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- 期別
- 2005-038-2-0107-0115
- 作者
- 蕭振文、蔡麗卿、劉瑞珍、 陳立人
- 關鍵字
- 性別鑑、乳牛、探針、同步聚合?連鎖反應。/
- 摘要
- 本研究旨在利用同步聚合連鎖反應 （real-time polymerase chain reaction, real-time PCR），配合 SyberGreen （SYBR） 與螢光標定的探針 （probe） 進行乳牛的性別鑑定，以探討 real-time PCR 應用之可行性。利用純化之不同性別乳牛基因組 DNA 與體外培養 （in vitro culture） 之荷蘭母牛卵丘細胞或公牛耳朵成纖維細胞做為性別鑑定之樣品，先經蛋白 K （proteinase K） 前處理後利用 ZFX/ ZFY （X/Y-linked zinc finger protein）引子進行傳統 PCR 預先擴增 （pre-amplification），獲得 PCR 產物後設計 nested PCR 引子並應用 SYBR 進行 real-time PCR。結果顯示隨著起始模板 DNA 濃度之增加，PCR 出現擴增曲線的循環較早。雖然如此，但在不同 PCR 循環所獲得的產物均具有專一性且重疊的 DNA解離曲線 （dissociation curve），顯示PCR 擴增產物之高度特異性。
預先擴增的初次 PCR產物配合 nested PCR引子及性別特異性的 TaqMan螢光探針進行雜合反應 （hybridization），由反應產生的不同螢光將不同性別樣品分群而判定其性別。試驗結果顯示，待測之基因組 DNA或 1到 20個不同數量的體細胞樣品在雜合反應後因釋放螢光之不同而分群，有效完成性別鑑定。本研究顯示，應用 real-time PCR 進行乳牛的性別鑑定，可直接判定樣品之性別而不需進行傳統之電泳分析，且有較高的敏感性與重覆性，為具應用潛力的乳牛性別鑑定方法。
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