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- 期別
- 1996-029-2-0157-0167
- 作者
- 吳明哲、李秀美、駱亞欣、黃瓊姿
- 關鍵字
- 兔、卵、玻璃化冷凍、大小、螢光染色。
- 摘要
- 本試驗用的兔卵取自成熟的白色紐西蘭種母兔 11 頭和毛皮生產用的雷克斯種母兔四頭之卵巢。卵巢先以組織培養液 mDPBS 來洗滌三次，再放入含有 18% 胎牛血清的培養液中，以刀尖刺破卵巢上濾泡，平均每頭兔可回收到 15 個卵，數目1至 78 不等。兔卵的急速冷凍用保護劑為 Ethylene Glycol(EG)和 Ficoll 70(F70)，分別先以 18% 胎牛血清的 mDPBS 來調配成 40% EG 和 18% F70 溶液，兩種溶液再以 2:1 容積比調和成最終冷凍溶液。共計有 182 個卵被吸置入冷凍溶液中，每頭兔卵分別吸填入 0.25 ml 麥管，封口後至已浸置 10 分鐘時，就把麥管直接投入液態氮，完成急速冷凍步驟。解凍時，冷凍麥管自液態氮桶取出就直接投入 20℃ 水浴槽，一分鐘後取出再擠出解凍卵於 1.0 M 蔗糖溶液中，經 10 分鐘後檢視外觀完整的卵，完整率為 82.4±20.2%。完整的解凍卵經檢出並培養於 18% 胎牛血清的 mDPBS 中 20 分鐘，存活率為 77.5±20.3%。存活卵的直徑為 145.2±17.1 μm，透明帶厚度為 18.5±2.8 μm，卵細胞直徑為 108.0±14.9 μm。存活卵經活性 Rhodamine 123 螢光染色後，觀察其粒線體分佈均勻等級，有 2.8% 的存活卵仍具有如新鮮卵般的均勻分佈相，餘依序有 11.2、23.4、14.0、22.4 和 26.2% 的存活卵之粒線體分佈呈次均勻分佈、粉圓狀聚集、油滴狀散佈、蜂巢式孔洞和片塊狀。
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