盤固草逢機增殖核酸多型性(RAPD)分析效率的改進
- 期別
- 1995-028-4-0235-0244
- 作者
- 陳嘉昇、王紓愍、成游貴
- 關鍵字
- 指草、逢機增殖核?酸多型性、去氧核糖核酸萃取、聚合?連鎖反應條件。
- 摘要
- 本試驗以指草為材料，探討染色體組 DNA 萃取步驟的簡化及 PCR 反應時間的縮短，以提高 RAPD 分析效率，使更有利於植物遺傳、育種及分類研究之用。依快速的 DNA 萃取法，只需 20 mg 的植物材料，加入 Tris-SDS 或 CTAB 緩衝液以均質機研磨萃取，不須經過 65℃ 水浴振盪，即可獲得足夠進行 300 次 RAPD 分析之染色體組 DNA，但以 CTAB 緩衝液萃取時不能省略 chloroform/isoamylalcohol 分溶的步驟，否則將影響 DNA 產量。適當的調整 PCR 反應時之變性、結合及 DNA 聚合作用的條件，可有效縮短 RAPD 分析時間，並且不影響環帶訊息與再現性。調整條件因使用之 PCR 機型而異，適宜於 Perkin-Elmer Cetus DNA thermal cycler-480 的條件為:94℃ 20 sec, 34℃ 1min, 72℃ 30 sec 共進行 35 個循環；Idaho-1605 air thermal cycler 的條件為:92℃ 0 sec, 40℃ 20 sec, 72℃ 90 sec 進行 45 次循環，同時 RAPD 圖譜不因機型不同而異。