第三型抗凍蛋白對極體形成前後豬卵之冷凍保存效果(農業部畜產試驗所)

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第三型抗凍蛋白對極體形成前後豬卵之冷凍保存效果

摘要: 研究之目的係在評估冷凍處理對極體形成前後的豬卵型態之影響。豬卵取自經 PMSG 和 HCG 注射誘發排卵的蘭嶼品種新母豬。HCG 注射後 42 至 46 小時，利用外科手術沖集新母豬輸卵管內的卵。沖集所得之卵，分別以有或無添加第三型抗凍蛋白質(Antifreeze protein type Ⅲ，20 mg/ml)之含 1.5 M 甘油的 mDPBS 溶液逐步平衡之。然後分裝於 0.25 ml 麥管，再由 25℃ 以每分鐘降 1℃ 之速率降溫到 -6.8℃，植冰並維持 -6.8℃ 達 10 分鐘後，以每分鐘 0.3℃ 的速率降到 -30℃，2 到 3 分鐘後直接移入液氮中保存。麥管解凍則於取出液氮桶後直接投入 30℃ 溫水行之，待麥管內容物融解後，以蔗糖溶液逐步脫去甘油。試驗結果顯示，已排出第一極體、未包覆有卵丘細胞之成熟卵，其於有或無添加抗凍蛋白質的甘油抗凍液中冷凍解凍後，仍保有完整透明帶及卵細胞型態者之比例分別為 79%(45/57)及 61%(25/41)。而未排出第一極體之卵細胞，不論甘油抗凍液中是否添加有抗凍蛋白質，冷凍解凍後有透明帶碎裂或卵細胞皺縮等失去正常之細胞型態之狀況，保有正常卵細胞型態和完整透明帶比例，兩者均為 0%。解凍的成熟卵 49 個分為三組，分別授予 500、2500 或 5000 個獲能精子卵，有 15%(3/20)、25%(5/20)和 67%(6/9)的體外受精卵可發育至桑椹胚。