應用海草酸鈉微膠包埋法改善業經顯微操作後胚存活率之可行性
- 期別
- 1993-026-3-0213-0228
- 作者
- 許登造
- 關鍵字
- 微膠包埋、同卵雙胞胎、冷凍保存胚。
- 摘要
- 本試驗嘗試以海草酸鈉(Sodiumalginate)微膠包埋小鼠和家畜早期胚，補償因胚經顯微操作後，透明帶所受傷害或除去透明帶所減少之保護作用，俾提高顯微操作後胚之移置成功率。試驗結果証實:以 Sodium alginate 微膠包埋可得到比 Agar 或 Gelatin 較小之體積。經以 Hoechst 33342 螢光染色亦証實 Sodium alginate 微膠包埋較具有半透膜之滲透性。並証實以 Sodium alginate 微膠包埋直接移置証實能於體內自然消失，移置試驗獲得仔羊出生。體外培養發育觀察証實於小鼠胚(8細胞未顯微操作之胚，半切胚和擠壓法嵌合體胚)其微膠包埋後之發育，並無顯微操作胚因包埋而有下降。包埋後發育至一段時間再以 Sodium citrate EDTA 去除膠囊亦無影響其往後之發育。家畜胚之嵌合體和複殖體之製造時之顯微操作，仍需裝入外來借用透明帶內再進行微膠包埋則比較容易進行胚操作。 Sodium alginate 微膠包埋之胚之冷凍保存於 -196 ℃ 液氮中之方法，以緩慢典型方法冷凍結果証實小鼠桑椹胚、8細胞擠壓之嵌合胚、4細胞期山羊胚以及水牛卵等，均獲得冷凍成功。帶膠囊冷凍綿羊胚移置試驗亦獲得2隻羔羊出生。然而以玻璃法(vitrification)冷凍者則無發現生存之胚。豬孵化中胚之嘗試以微膠包埋後以典型緩慢法降溫冷凍保存，融解後亦無得到生存之胚。黑肚綿羊胚分切後後直接微膠包埋移置試驗並無得到懷孕成功之例，但分切胚再裝入空透明帶移置之對照組，移置則得到一對同卵雙胞胎綿羊。乳牛則無裝入空透明帶亦得一同卵雙胞胎之成功之例。今後仍繼續進行家畜胚顯微操作後加以微膠包埋之移置試驗，以証實微膠包埋於生殖道內是否確實有保護作用。